雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)介紹：雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)是來自Hyline SC 雞法氏囊淋巴細(xì)胞株經(jīng)鳥類白血病病毒誘導(dǎo)建株的。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒1(RAV-1)感染出生１天的小雞得到。法氏囊中生成的腫瘤制成細(xì)胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體小雞。經(jīng)過一次體內(nèi)移植后，建立了DT40 細(xì)胞株。這株細(xì)胞包含的前病毒基因整合在c-myc 原癌基因的上游，表達(dá)的c-myc RNA 水平較高。它缺少一個(gè)正常c-myc 基因，但含有兩個(gè)拷貝ALV去調(diào)控的myc 基因。這株細(xì)胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力。在IgL 位點(diǎn)，DT40 包含一個(gè)重排和一個(gè)胚系同源基因。c-rel 基因和v-rel 癌基因在DT40 細(xì)胞株中都能誘導(dǎo)組織相容性(MHC)II 類抗原表達(dá)。v-rel 誘導(dǎo)的MHCII 表達(dá)比c-rel 誘導(dǎo)快，且其有效性在數(shù)周后達(dá)到c-rel 的50 倍。這株細(xì)胞呈淋巴母細(xì)胞表型。傳染性檢測(cè)表明DT40 釋放低水平的傳染性RAV-1。雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究。
雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)特性：
1） 來源：雞淋巴瘤
2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)用途：僅供科研使用。
雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)培養(yǎng)步驟：
一．雞淋巴瘤細(xì)胞(DT40)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM 培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11965-092)，85%；胎牛血清，10%，雞血清，5%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?/span>細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM 條件下離心4 分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
