HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產物（同時也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長片段末端重復區(qū)的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內切酶系統(tǒng)，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量；此菌株具有鏈霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。對HB101使用LB，在37℃有氧的環(huán)境下培養(yǎng)，然后使用20%的甘油保藏菌種，42℃熱激處理可將質粒成功轉入HB101中。
