| 產品名稱 |
A375-EGFP |
| 商品貨號 |
MZ-2056 |
| 中文名稱 |
人惡性黑色素瘤細胞 |
| 細胞數量 |
1*10^6 |
| 組織來源 |
人黑色素瘤 |
| 細胞形態 |
上皮樣細胞 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養基 |
DMEM+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%P/S |
| 傳代方法 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。 |
| 細胞描述 |
A375 源自一位54 歲女性，是Giard DJ 等人建立的一系列細胞株中的一株。該 細胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆。 A375-EGFP 是在A375 細胞上用慢病毒標記上EGFP，可以顯示綠色熒光，帶有 嘌呤霉素抗性。 |
| 培養條件 |
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 細胞凍存 |
Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 |
| 細胞復蘇步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 細胞運輸 |
干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸（T25細胞瓶） |
